Прямой антиглобулиновый тест (ПАГТ), полиспецифический (прямая проба Кумбса)

Прямой антиглобулиновый тест (ПАГТ) с полиспецифическим античеловеческим глобулиновым реагентом (AHG) — также называемый прямой пробой Кумбса — оценивает эритроциты на наличие поверхностно-связанных иммуноглобулинов и/или комплемента. Исследование назначают при подозрении на иммунно-опосредованный гемолиз и оно помогает поддержать диагноз аутоиммунной гемолитической анемии, демонстрируя in vivo покрытие эритроцитов. При положительном результате последующее исследование с моноспецифическими реагентами анти-IgG и анти-комплемент уточняет связанный компонент.

Аутоиммунные гемолитические анемии возникают, когда антитела нацеливаются на антигены эритроцитов, что приводит к их разрушению либо в сосудистом русле, либо в ретикулоэндотелиальной системе. Внутрисосудистый гемолиз обычно отражает комплемент-опосредованное повреждение, инициированное антителами — чаще всего IgM — с формированием комплекса мембранной атаки; такие антитела называют холодовыми, поскольку они наиболее эффективно связываются при 4–18 °C. Внесосудистый гемолиз обусловлен захватом макрофагами эритроцитов, опсонизированных IgG и/или C3, через Fc- и комплементные рецепторы; такие антитела называют тёплыми, и они оптимально связываются при 37 °C. Лабораторное выявление опирается на присутствие связанных с эритроцитами иммуноглобулинов и компонентов комплемента как маркеров иммунного гемолиза. Аутоантитела могут проявлять свойства гемолизинов (лизируют клетки) или агглютининов (склеивают клетки), и большинство методик обнаружения используют in vitro агглютинацию. Современный подход использует гелевую агглютинацию: суспензию эритроцитов пациента добавляют в микротрубки, содержащие гель, пропитанный полиспецифическим античеловеческим глобулиновым реагентом, распознающим IgG и C3 и способным также реагировать с IgA и IgM. После центрифугирования неагглютинировавшиеся клетки проходят через гель и образуют компактный осадок на дне, тогда как агглютинированные клетки задерживаются в толще или на поверхности геля, что указывает на покрытие антителом и/или комплементом. Положительный полиспецифический ПАГТ документирует in vivo сенсибилизацию эритроцитов, но не определяет конкретный связанный компонент. Характеризация с использованием моноспецифических реагентов (анти-IgG, анти-IgA, анти-IgM, анти-C3, анти-C3b, анти-C3c, анти-C3d и анти-C4) уточняет интерпретацию. Прямой тест выявляет только антитела, связанные с клетками; циркулирующие антитела могут присутствовать в сыворотке и оцениваются в непрямом антиглобулиновом тесте, при котором сыворотку пациента инкубируют с донорскими эритроцитами с последующим применением того же принципа агглютинации.